高孟雨 1,2 , 朱星龙 2,3 , 王诗盛 4 , 张炳琪 2,3 , 张芸琳 2,3 , 何宇婷 2,3 , 周燕燕 2 , 李顺 5 , 杨光 6 , 廖光能 6 , 包骥 2,3 , 步宏 1,2
  • 1. 四川大学华西医院 病理科(成都 610041);
  • 2. 四川大学华西医院 临床病理研究所(成都 610041);
  • 3. 四川大学华西医院 卫生部移植工程与移植免疫重点实验室(成都 610041);
  • 4. 四川大学华西医院 华西华盛顿线粒体与代谢研究中心(成都 610041);
  • 5. 电子科技大学 生命科学技术学院 生物物理研究室(成都 611731);
  • 6. 四川大学华西医院 实验动物中心(成都 611731);
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规律性短重复回文序列簇(CRISPR)和 CRISPR 辅助蛋白 9(Cas9)构成的 CRISPR/Cas9 基因编辑技术快速推进了基因修饰猪作为医学研究模式动物的广泛应用。而高效的靶基因单链向导 RNA(sgRNA)是利用 CRISPR/Cas9 技术进行基因编辑成功的关键,对于猪等繁殖周期较长的大动物,则需要在实施动物实验前,在体外筛选出高效的 sgRNA 以避免时间和资源成本浪费。另外,如何高效获得阳性基因编辑单克隆细胞是目前尚待解决的难题。本研究建立了靶向猪基因组的 sgRNA 快速筛选方法,利用荧光载体富集基因编辑细胞,同时探索利用图案微阵列培养技术快速获得单克隆细胞的方法,在此基础上高效获得延胡索酰乙酰乙酸酶(Fah)基因编辑细胞,为后续生产作为人类肝细胞生物反应器的Fah基因敲除猪奠定基础。

引用本文: 高孟雨, 朱星龙, 王诗盛, 张炳琪, 张芸琳, 何宇婷, 周燕燕, 李顺, 杨光, 廖光能, 包骥, 步宏. 靶向猪基因组单链向导RNA快速筛选以及利用图案微阵列收获单克隆细胞的研究. 生物医学工程学杂志, 2021, 38(1): 111-121. doi: 10.7507/1001-5515.202006032 复制

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